Причины могут быть следующие:
1) низкая температура в помещении (ниже 15 ° С);
2) учета реакции произошло позднее 5 мин – сыворотка высыхает и симулирует агглютинацию;
3) при низкой температуре эритроциты состоят в «монетные столбики», симулируя агглютинацию, она легко исчезает при покачивании тарелочки или при добавлении физиологического раствора;
4) концентрированная стандартная сыворотка;
5) при наличии в исследуемой крови иммунных антител, если больной страдает сепсис, системные заболевания крови.
Иногда агглютинацию можно не заметить, это бывает при следующих условиях:
а) определение групп крови проводится при температуре выше 25-30 ° С;
6) реакцию учитывают ранее чем через 5 мин;
в) титр агглютининов низкий (ниже 1:32) и при этом определяют группу крови с помощью одной серии сывороток;
г) не соблюдены соотношение сыворотка – кровь и последней много.
Наиболее достоверным методом определения группы крови является применение Цоликлоны анти – А и анти-В. Они являются продуктом гибридомных клеточных линий, полученных в результате слияния мышиных антителообразующих В- лимфоцитов с клетками мышиной миеломы. Цоликлоны не являющихся продуктами жизнедеятельности клеток человека, это асцитическая разведенная жидкость мышей – носителей соответствующей гибридом, содержащую специфические иммуноглобулины класса М, которые направлены против антигена А У человека.
Цоликлоны анти – А и анти-В выпускаются в виде жидкости во флаконах или ампулах по 20, 50, 100 и 200 доз. Жидкость содержит консервант – 0,1% и азид натрия, окрашенная в синий (анти – А) или розовый (анти-В) цвет. Флаконы хранятся около двух лет в холодильнике при температуре +2- +8 ° С. При определении группы крови в нативной крови с консервантом и без него лучший результат бывает при высокой концентрации эритроцитов. На планшет или тарелочку при температуре в помещении 15-20 ° С наносят по 1 капле (0,1 мл) Цоликлоны анти – А и анти-В, затем исследуемую кровь (капля ее должна быть в 10 раз меньше), смешивают в течение 3 мин, наблюдают за реакцией. Если агглютинации нет в обоих Цоликлоны, это первая, если агглютинация происходит с Цоликлоны анти – А – это вторая, если с анти – В – это третья и если агглютинация есть в обоих Цоликлоны – это четвертая группа крови.